Ítarleg skýring á sveiflum í PCR tilraunum

Ítarleg skýring á sveiflum í PCR tilraunum.

Í PCR tilrauninni, eftir að viðbragðskerfið hefur verið bætt við, hyljum við lokið vandlega og staðfestum ítrekað að lokið sé lokað til að forðast sveiflur í hvarfefni. En stundum höfum við líka efasemdir: við höfum staðfest að lokið er þétt lokað, en eftir að tilrauninni er lokið mun hvarfefnið enn gufa upp. hver er ástæðan?

Reyndar er svarfefni sveiflur eitt algengasta vandamálið í PCR tilraunum og það eru margir þættir sem hafa áhrif á sveiflur.

Uppgufun vísar til þess meðan á PCR tilrauninni stendur gufar hvarflausnin upp við háan hita og þéttist síðan á flöskuveggnum eða efstu hlífinni til að mynda vatnsmist eða vatnsdropa, eða streyma beint úr loftbilinu á flöskuhettunni eða filmu, sem leiðir til þess við breytingu á styrk hvarflausnarinnar. Breytingar, magn hvarflausnar minnkaði og sumar gufuðu jafnvel upp í þurrki, sem leiddi til ógildra tilrauna.

1. Heitt lokþrýstingur, hitastig

Í PCR tilraunum hitum við venjulega lokið til að koma í veg fyrir þéttingu hvarfefnisgufu. Hitastig hitaða loksins er venjulega hærra en hvarflausnin til að koma í veg fyrir þéttingu gufa.

Hægt er að skipta hitauppstreymishitunarlokum gróflega í eftirfarandi fjórar gerðir: ekki stillanlegar upphitunarlok, stillanlegar upphitunarlok, aðlögunarhitunarlok og sjálfvirkar hita loki. Stillanlegt upphitað lok er með fingurþéttri samþjöppun. Ef ekki er hert þétt, gufar hvarfefni upp. Hægt er að lágmarka uppgufun á brún með því að auka þrýstinginn á upphitaða lokið. Stundum getur overgeening klemmt slönguna og snúið hnappinum. Undir venjulegum kringumstæðum getur rafmagns snjallhitunarhlífin sjálfkrafa greint rekstrarvörur af mismunandi hæðum, sjálfkrafa þjappað saman rekstrarvörum og þrýstingurinn er einsleitur og stöðugur og dregur þannig úr uppgufun hvarfefna og handvirkum villum og bætir nákvæmni tilrauna og endurtekningarhæfni.

2. aflögun rekstrarvara

Fyrir gufu leka telja flestir að heitur lokþrýstingur sé ekki nægur. Þrýstingurinn á heitu lokinu er mjög mikilvægur, en það er aðeins einn þáttur. Reyndar eru rekstrarvörur einnig mjög mikilvægar.

PCR opnunarplötur eru venjulega úr plastefni, sem stækka og afmyndast mjög eftir að hafa verið hituð. Varmaþensluhraði PCR málmgrunnsins sem notaður er til að setja PCR -opnunarplötuna er mjög lágt og PCR -plata getur ekki stækkað venjulega meðfram planinu eftir hitauppstreymi. Bullandi ástand gerir efsta hitaþekjuna ekki að snert að fullu yfirborði PCR -plata, sem leiðir til ójafns hitastigs og þrýstings, sem veldur uppgufun hvarfefna við jaðar PCR -plata og hefur áhrif á PCR uppgötvunaráhrif.

3. Rekstrarvörur eru ekki þétt innsiglaðar

Þéttleiki hitauppstreymisins og rekstrarvörur þýðir ekki að PCR rörhettan sé þétt lokuð og gæði PCR holuplötunnar séu ójöfn. Hágæða rekstrarvörur, yfirborð stútsins og hlífin eru slétt og innsiglið á bak við kassakápuna er gott og það er ekki auðvelt að leka. Óæðri rekstrarvörur hafa misjafn spúða og geislamyndunarlínur, sem geta auðveldlega valdið leka eða jafnvel þurrkað út.

Þess vegna, í PCR tilraunum, reyndu að velja hágæða og viðeigandi rekstrarvörur. Á sama tíma er hægt að stækka viðbragðskerfið til að lágmarka áhrif uppgufunar kerfisins á hvarfið.